A Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) desempenha um papel fundamental na regulamentação e aprovação de medicamentos no Brasil.

Recentemente, a ANVISA divulgou a Resolução da Diretoria Colegiada (RDC) nº 749, que apresenta avanços importantes no processo de obtenção de bioisenção para medicamentos.

Um aspecto chave dessa nova regulamentação é a avaliação de permeabilidade em células Caco-2, uma abordagem alternativa inovadora com benefícios significativos no processo de bioisenção de medicamentos, disposta na Instrução Normativa – IN n° 182.

O que é a bioisenção de medicamentos?

A bioisenção é um processo pelo qual um medicamento similar pode ser considerado terapeuticamente equivalente a um medicamento de referência, sem a necessidade de realizar estudos clínicos de bioequivalência. Isso é possível quando o medicamento genérico/similar demonstra ser absorvido de maneira semelhante ao medicamento de referência, alcançando concentrações no sangue que são bioequivalentes.

Importância e metodologia de avaliação de permeabilidade em células Caco-2:

A nova RDC 749 dinâmica a avaliação de permeabilidade em células Caco-2 como um método alternativo para comprovar a bioisenção de medicamentos. As células Caco-2 são uma linha celular derivada de um carcinoma colorretal humano e são amplamente utilizadas como modelo in vitro para estudar a permeabilidade intestinal.

Essas células são cultivadas em placas de cultura e formam uma monocamada que simula a barreira intestinal. Através da medição da taxa de transporte de uma substância através das células Caco-2, é possível determinar sua permeabilidade intestinal e prever seu comportamento de absorção no trato gastrointestinal.

A avaliação da permeabilidade em células Caco-2 envolve um protocolo com uma série de etapas. Embora os detalhes específicos possam variar dependendo dos requisitos do estudo, a seguir está um passo a passo do modelo da metodologia e avaliação:

1. Cultivo de células Caco-2:
   • Cultivo das células Caco-2 em frascos e meio de cultura adequada, obedecendo às condições de cultivo específicas;
   • Manutenção das células em uma atmosfera de 5% de dióxido de carbono (CO2) e 37°C.
2. Preparação das placas de cultivo de células Caco-2:
   • Preparação das placas de cultura Transwell com membranas permeáveis ​​(geralmente feitas de policarbonato) e tamanho adequado;
   • Imersão das membranas em uma solução de colágeno ou outros revestimentos adequados para melhorar a adesão celular.
3. Semeadura das células Caco-2 nas placas:
   • Remoção do meio de cultura das células Caco-2 e lavagem das células com solução salina tamponada com fosfato (PBS);
   • Despreendimento das células do frasco utilizando uma solução de tripsina e promoção de uma suspensão celular em meio de cultura adequada;
   • Adição das células Caco-2 nas câmaras superiores das placas Transwell, permitindo que as células sejam semeadas nas membranas.
4. Incubação e diferenciação celular:
   • Após a semana, as placas Transwell são incubadas em condições específicas para permitir a diferenciação das células Caco-2;
   • Aplicação do meio de cultura tanto nas câmaras superiores como nas inferiores para criação de um gradiente de concentração que mimetize a fisiologia intestinal.
5. Monitoramento da integridade da monocamada:
   • Verificação da integridade da monocamada celular por meio de espessura da resistência elétrica transepitelial (TEER) utilizando um medidor de resistência adequado;
   • Certificação de que o TEER atingiu um nível estável antes da obrigação com os experimentos.
6. Adição de compostos de teste:
   • Remoção do meio de cultura das câmaras superiores e adição do composto de teste (medicamento ou substância) em concentrações específicas;
   • Incubação das células Caco-2 com os compostos de teste por um período de tempo especificado.
7. Coleta de amostras e análise:
   • Após o período de incubação, coleta das amostras das câmaras inferiores para análise da quantidade do composto teste que atravessou as células Caco-2;
   • Realização da análise através de técnicas como cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), espectrometria de massa ou outros métodos analíticos.
8. Cálculo da permeabilidade:
   • Cálculo da permeabilidade do composto teste utilizando a fórmula, que envolve o cálculo da taxa de transporte através das células Caco-2, a área da membrana e o tempo de incubação.

É importante ressaltar que este é um protocolo básico e que pode haver variações nos detalhes e nas condições experimentais dependendo do objetivo específico do estudo.

Benefícios da avaliação de permeabilidade em células Caco-2:

• Redução de estudos clínicos: 

A utilização da avaliação de permeabilidade em células Caco-2 pode eliminar a necessidade de condução de estudos clínicos de bioequivalência, reduzindo significativamente os custos e o tempo necessário para o fornecimento de bioisenção de medicamentos genéricos.

• Precisão e confiabilidade: 

As células Caco-2 fornecem um modelo relevante e confiável para avaliar a permeabilidade intestinal de medicamentos. Os resultados obtidos através dessa abordagem são altamente preditivos e podem fornecer informações inovadoras sobre a absorção dos medicamentos.

• Redução de testículos em animais: 

A avaliação de permeabilidade em células Caco-2 oferece uma alternativa ética e sustentável aos estudos em animais. Ao substituir os testes tradicionais em animais por testes in vitro, podemos reduzir o uso de animais de laboratório, alinhando-se com os princípios de bem-estar animal.

• Estímulo de pesquisa científica: 

A introdução da avaliação de permeabilidade em células Caco-2 na RDC 749 estimula a pesquisa científica e o desenvolvimento de novas metodologias in vitro. Isso pode levar a avanços avançados na compreensão da tomada de medicamentos e na melhoria dos modelos de previsão de permeabilidade.

A avaliação de permeabilidade em células Caco-2, introduzida pela RDC 749 da ANVISA, representa um marco importante no processo de obtenção de bioisenção de medicamentos. Essa abordagem inovadora traz benefícios, como a redução de estudos clínicos, maior precisão e confiabilidade, redução de testes em animais e estímulo à pesquisa científica.

É fundamental que a indústria farmacêutica e os reguladores trabalhem juntos para implementar essa nova regulamentação e garantir que os medicamentos genéricos disponíveis no mercado sejam de qualidade, seguros e eficazes. A avaliação da permeabilidade em células Caco-2 é uma alternativa segura para contribuir para a inovação e aprimorar a disponibilidade de opções terapêuticas para os pacientes.

Sobre a colheita

A Crop é um laboratório integrado de P&D especializado em serviços pré-clínicos de eficácia e segurança, utilizando metodologias alternativas de cultura celular e biologia molecular para as indústrias de terapêutica avançada, farmacêutica, ingredientes cosméticos e saneantes. 

Nossa missão é colaborar com o amadurecimento tecnológico de produtos e desenvolvimentos em ciências da vida: da ideia ao impacto, levando a ciência da bancada para o mercado e para as pessoas.

Nossa equipe de desenvolvimento de produtos desenvolve uma avaliação de permeabilidade em células Caco-2 para fornecimento de bioequivalência de medicamentos similares de forma ágil e custo-efetiva, confirmados às normativas regulatórias vigentes e ao mercado.

Entre em contato com nossa equipe e saiba como podemos contribuir: https://cropbiolabs.com.br/contact-us/

Referências:

ANVISA. Resolução da Diretoria Colegiada – RDC nº 749 , de 05 de setembro de 2022. Dispõe sobre autorização de estudos de bioequivalência/biodisponibilidade relativa, Diário Oficial da União, 08 de setembro de 2022.

ANVISA. Instrução Normativa – IN n° 182, de 05 de setembro de 2022 . Dispõe sobre a validação e ensaios de permeabilidade com células Caco-2, Diário Oficial da União, 08 de setembro de 2022.

ANVISA. Perguntas e Respostas – RDC nº 749/2022 ; IN nº 182/2022 e IN nº 183/2022, 19 de abril de 2023. Disponível em: https://www.gov.br/anvisa/pt-br/centraisdeconteudo/publicacoes/medicamentos/bioequivalencia/pr-749_2022_ver_01_19_04_2023-1 .pdf