De acordo com o Sistema Globalmente Harmonizado de Classificação e Rotulagem de Produtos Químicos das Nações Unidas (UN GHS), a sensibilização da pele refere-se a uma resposta alérgica após o contato da pele com um produto químico.

Seguindo a OECD 442, Guideline for the testing of Chemicals: In Chemico Skin Sensitisation, para avaliação da sensibilização cutânea, é ideal que haja uma avaliação prévia de todas as informações disponíveis sobre a composição do produto ou ativo testado, como dados de testes anteriores in vitro, in vivo, dados humanos históricos, (Q)SAR válidos (relações estrutura-atividade (quantitativas)) e substâncias estruturalmente relacionadas.

Assim, os testes in vivo só são necessários se os métodos in vitro não forem adequados para a substância ou se os resultados dos testes in vitro não forem adequados para a classificação e avaliação dos riscos.

O teste in vivo não precisa ser realizado se as condições especificadas na coluna 2 do Anexo VII, Seção 8.3 do Regulamento REACH sobre a substância forem atendidas, incluindo:

• Classificação da substância como corrosão cutânea (Cat 1); ou

• Definição da substância como ácido forte (pH <2) ou base (pH >11,5); ou

• Identificação da substância como espontaneamente inflamável no ar, em contacto com água ou humidade à temperatura ambiente.

Levando isso em consideração, sugerimos o seguinte fluxo de trabalho:

1. Use a caixa de ferramentas QSAR in silico para prever riscos de produtos/ativos:

A caixa de ferramentas QSAR da OCDE é um software disponível gratuitamente, desenvolvido em conjunto pela ECHA (Agência Europeia dos Produtos Químicos) e pela OCDE. Fornece ferramentas para realizar ou apoiar avaliações de perigos químicos para a maioria dos parâmetros de interesse regulatório. Usando estrutura química e outros identificadores, o software identifica análogos de um alvo e faz previsões com base em leituras automatizadas e alertas estruturais.

2. Defina o evento-chave específico dentro do caminho de conscientização:

O evento específico chave na via de sensibilização pode ser a interação molecular com proteínas da pele; resposta inflamatória em queratinócitos e ativação de células dendríticas. Vamos conhecer os métodos para definir cada um:

• Interação molecular com proteínas da pele

O método para testar a interação molecular com proteínas da pele corresponde à OCDE 442C, contendo três ensaios químicos que abordam a reatividade peptídica:

i) Ensaio Direto de Reatividade Peptídica (DPRA);

ii) Ensaio de Reatividade de Derivados de Aminoácidos (ADRA);

iii) Ensaio Cinético Direto de Reatividade Peptídica (kDPRA).

Os métodos DPRA e ADRA identificam perigos e o teste kDPRA identifica sensibilizadores potentes (subcategoria 1A). O ensaio kDPRA pode ser usado como um teste independente se o resultado indicar que o produto/ativo pertence à subcategoria 1A (subcategoria de agentes sensibilizantes fortes).

• Resposta inflamatória em queratinócitos

O método para testar a resposta inflamatória em queratinócitos corresponde à OCDE 442D, contendo dois testes que utilizam detecção de luminescência para medir a expressão gênica de vias dependentes do elemento de resposta antioxidante/eletrófilo (ARE – expressão do elemento de resposta antioxidante/eletrófilo), sendo:

i) método de teste ARE-Nrf2 luciferase KeratinoSens™;

ii) Método de teste LuSens de luciferase ARE-Nrf2.

• Ativação de células dendríticas

O método para testar a ativação de células dendríticas (DC) corresponde à OCDE 442E, contendo três testes:

i) Teste de Ativação de Linhagem Celular Humana (h-CLAT), que mede, por citometria de fluxo, os níveis de expressão de marcadores de superfície ligados à maturação das DC, ou seja, CD86 e CD54;

ii) teste de ativação da linha celular U937 (U-SENSTM), que mede níveis específicos de CD86;

iii) Ensaio do Gene Repórter da Interleucina-8 (Ensaio IL-8 Luc), que mede alterações em uma citocina ligada à ativação de DC, através da detecção de mRNA de IL-8.

A tabela abaixo apresenta o resultado da classificação da Sensibilização, conforme método e diretriz correspondente:

Saiba mais sobre o teste de sensibilização cutânea in vitro e outros serviços da Crop Biolabs para ingredientes cosméticos: https://cropbiolabs.com.br/cosmetic/

Referências:

1. Documento de Orientação da OCDE sobre Relatórios de Abordagens Definidas e fontes de informação individuais a serem usadas dentro de Abordagens Integradas para Testes e Avaliação (IATA) para sensibilização cutânea ( OCDE GD 256, 2016 )
2. Orientações sobre requisitos de informação e avaliação de segurança química, secção R.7.3 ( ECHA Guidance R7a ): https://echa.europa.eu/documents/10162/17224/information_requirements_r7a_en.pdf/e4a2a18f-a2bd-4a04-ac6d-0ea425b2567f?t =1500286622893
3. Orientações sobre requisitos de informação e avaliação de segurança química ( ECHA Guidance R.4 ): http://echa.europa.eu/documents/10162/13643/information_requirements_r4_en.pdf