Avaliação e fotodocumentação por microscopia invertida da diferenciação celular em três linhagens celulares: osteogênese (coloração com Alizarin Red S), adipogênese (coloração Oil Red) e condrogênese (coloração com azul de toluidina).

Técnica: Cultura celular

Referência: RDC nº 508, de 27 de maio de 2021.

Detecção da presença de gDNA com primers específicos para regiões intergênicas 16S-23S de espécies de Mycoplasma com maior incidência de contaminação de cultura celular (M. arginini, M. fermentans, M. hominis, M. hyorhinis, M. orale, M. salivarium , M. pirum, A. laylawii) usando a técnica qPCR.

Técnica: qPCR

Referência: Pontos da FDA a serem considerados na caracterização de linhas celulares usadas para produzir produtos biológicos .

Preparação de amostras e detecção de penicilina e estreptomicina no sobrenadante de cultura celular por LC-MS.

Técnica: Cromatografia líquida–espectrometria de massa (LC–MS).

Referência: EMA – ICH Tópico Q3: Impurezas. (Incluindo diretrizes sobre “Impurezas em Novas Substâncias Medicamentosas”, “Impurezas em Novos Medicamentos” e “Impurezas: Solventes Residuais”).

Detecção semiquantitativa de endotoxinas presentes no sobrenadante de cultura celular utilizando o método Gel Clot LAL.

Técnica: lisado de amebócitos Limulus (LAL)

Referência: Pontos da FDA a serem considerados na caracterização de linhas celulares usadas para produzir produtos biológicos .

Quantificação, via LC/MS, de dimetilsulfóxido (DMSO) com curva de calibração pré-estabelecida.

Técnica: Cromatografia líquida–espectrometria de massa (LC–MS).

Referência: EMA – ICH Tópico Q3: Impurezas. (Incluindo diretrizes sobre “Impurezas em Novas Substâncias Medicamentosas”, “Impurezas em Novos Medicamentos” e “Impurezas: Solventes Residuais”).

Detecção de bactérias anaeróbias, bactérias aeróbias, leveduras e fungos através do inóculo de amostras em Caldo Tioglicolato e Caseína de Soja.

Referência: Farmacopeia Brasileira, 6ª edição teste de esterilidade (5.5.3.2.1).

Análise para quantificação de proteínas totais em diferentes tipos de amostras, lisado celular, secretoma, solução com proteínas livres. Usado em técnicas como Western Blotting. O ensaio BCA possui um detergente à base de ácido bicinconínico (BCA) que permite a detecção colorimétrica e quantificação de proteínas totais.

Referência: Tópico ICH Q3: Impurezas. (Incluindo diretrizes sobre “Impurezas em Novas Substâncias Medicamentosas”, “Impurezas em Novos Medicamentos” e “Impurezas: Solventes Residuais”).

Análise imunofenotípica por citometria de fluxo para marcadores de células-tronco mesenquimais, com interpretação de positividade quando ≥ 95% positivo para CD73, CD90 e CD105 e ≤ 2% negativo para CD34, CD45, CD11b ou CD14, CD19 ou CD79α e HLA-DR (International Society para Terapia Celular). Técnica: Citometria de fluxo (CD90, CD44, CD105 e CD73) BD FACSCalibur™.

Referência: Centro de Avaliação e Pesquisa Biológica da FDA AVANÇO DA CIÊNCIA REGULATÓRIA -Escritório de Tecidos e Terapias Avançadas Divisão de Terapias Celulares e Genéticas Ramo de Terapia Celular e Tecidual

Medicamentos à base de células estaminais da EMA – Orientação científica

Detecção de ácido nucleico de vírus CMV, HIV-1 e HIV-2, HTLV-I e HTLV-II, EBV, HBV, HCV e B19. Técnica: qPCR, RT-qPCR, Título viral infeccioso e TCID50.

Referência: RDC nº 508, de 27 de maio de 2021.